盖玻片染色盒的制作与应用

1 目的
1.1 减少二甲苯危害
二甲苯因其价格低,透明效果好,目前仍被国内大多数的病理科室使用。由于仪器设备条件限制，在制片过程中,技术操作人员或多或少都会受到这种有害物质地影响.为了减少二甲苯的影响，操作室内必须保证良好的通风。同时，作为工作者，我们在实际工作中也要想办法尽可能地减少与二甲苯的直接接触。
   常规制片中,退蜡和封片这两个步骤中使用到二甲苯。因退蜡过程中,因为二甲苯直接暴露于空气的时间很短,其影响可以忽略不计.但封片过程中,由于要保证组织的湿润状态，所以操作者不得不较长时间地暴露在二甲苯前。.如果封片数量较大,这种被二甲苯"熏蒸"的时间会更久
1.2 降低工作液损耗
牋 在常规制片中,酒精的损耗是相当大的.为了保证不同梯度的酒精浓度维持正常,经常性地测量及更新成为技术工作地重要部分.
影响酒精浓度变化的除了因组织脱出的水分稀释和少量的挥发影响外,最重要的原因就是来自上游的残留液.所以,如何减少残留液就成为降低工作液消耗的一个关键问题.
影响残留液多少的原因大致有以下三点:1,与工作液接触的总表面积.2,去除残留液的方法和强度.3,染色装置的结构及材料质地.
牋 我们在实际操作中,往往都是通过静置和抖动的方式除去经可能多的残留液.但是由于
1.3 提高安全性及效率
因为一般的染色架(栏框)是半开放的,所以在染色过程中,特别是通过晃动去除处残留液,用流水漂洗浮液时,均有可能造成丢片和掉片的问题.
在封片中,为了保证"湿封",载玻片必须一张一张的封胶,这种封片方式不仅效率底,而且操作者也不得不长时间地暴露在二甲苯的危害中.
2 制作
2.1 材料准备
制作这种盖玻片染色盒的工具及材料都是我们手边容易获得的.1,尖嘴钳一把.2,回形针数个.3,小刀一把(手术刀片也可).4,一次性塑料包埋盒数个.5,铅丝一小段.
2.2 制作步骤
步骤一:用尖嘴钳铰直数根回形针.
步骤二:用小刀将包埋盒的网格样底部切割去,只保留距长边约1毫米的边缘部分,则包埋盒已成为具有十多个横格的框架.
步骤三:将数个包埋盒按相同的方向垒叠一起,用铰直的回形针钢丝穿过包埋盒两端边框上的小洞,将其进行固定(最底部的包埋盒可以不用处理).一般根据盖玻片的长度大小来决定使用包埋盒的数量.

步骤四:在已成形的染色盒的顶和底加上包埋盒盖,一个小巧的盖玻片染色盒就制作完成了.
步骤五:为了防止在染色过程中,包埋盒的盒盖松动或脱落,利用回形针钢丝制作成有弹性的卡子,使其能正好卡住染色盒的顶盖和底盖.
步骤六:为了便于多个染色盒同步操作,我们也可将两个或者更多的染色盒固定在一起.这样,即使切片数量几十个甚至上百,也能一次性完成染色等过程.
步骤七:为了便于取放多个染色盒,我们可以用较粗的铁丝制成勾架,一端勾住染色盒的卡子,一端用于操作者握取.
2.3 一些特殊的处理和要求
在实际制作和应用染色盒时,我们还可能会遇到一些问题.下面就一些常见的问题和解决办法进行介绍.
2.3.1 不同大小的盖玻片
国内最常使用的一般都是宽固定为24毫米,而长度不等的盖玻片.所以,在制作盖玻片染色盒时,我们可以根据所使用的盖玻片的长度来决定使用包埋盒的数量.
2.3.2 如何微调调整染色盒高度
制作染色盒过程中,可能会遇到"增一盒太多,减一盒太少"的问题.为了微调包埋盒内部空间的高度,以更为精确地适应不同长度的盖玻片,我们可以采用一下几种方式解决:
(1)对盒盖进行加工.盒盖的内侧面周边都有一圈约1毫米高的边框隆起.用小刀将长边两侧的隆起削去,则染色盒内部空间的高度就可增加一毫米.
(2)调整包埋盒排列顺序.为了微调染色盒内部空间的高度,我们可以将最底部的包埋盒翻转后再与其它包埋盒一起固定,这样,染色盒的底部就可以用染色盒的盒盖做底.对盒盖进行处理后,即可使染色盒内部高度再增加1毫米.
(3)如果有必要,还可以利用包埋盒盖一次性增高3至5毫米.可以将盒盖的网格部分全部切除,然后垫在包埋盒之间一起用铅丝固定即可.
2.3.3 染色盒编号区别
当使用了两个或两个以上的染色盒时,我们必须对染色盒进行标记.可以用尖锐的东西在染色盒的侧面刻记上序号(如ABCD,或1234等),以方便封片时识别.
3 使用
3.1 贴片及染色和封片的步骤
使用盖玻片贴片,染色和封片,其过程与使用载玻片时是一致的.但是因为盖玻片更小,更薄,更易破损,而且不便标记,所以在具体使用过程中需要特别的仔细和认真.为了防止发生意外,我们要特别注意操作过程中的一些细节.
3.2 使用中要注意的一些细节
3.2.1 弯嘴小镊子夹玻片贴片
因为盖玻片小而易碎,在贴片时适合用小弯嘴镊操作.用镊子夹取盖玻片的一角进行捞片,对于较大的切片组织,可以将其推至展片池边缘处操作.
3.2.2 贴片留边1毫米
用盖玻片贴片时要尽可能将组织切片贴于中央处,组织距盖玻片边缘至少应保留1毫米的距离,以防止后续的步骤中边缘部位组织被刮损.
3.2.3 持盖玻片的指法
放置已贴片的盖玻片要特别小心.先将盖玻片夹于右手拇指与示指之间.注意:夹取和放置时手法要轻柔,手指应与玻片的平面垂直,以便能在目视小准确插放.
3.2.4 养成习惯,固定贴片放置方向
左手自烘片箱中拿出暂时去盖的染色盒,右手持玻片准确插入染色盒的档位中.为了避免混乱顺序和方向,在插片时应确定固定的方向和顺序,从起始端逐个放置.为了避免位于最边上的玻片组织被框沿擦损,可将其反向放置.这一片在封片时要特别注意调整盖片方向.
3.2.5 吸水纸吸去多余水分
为了调整组织位置,除去玻片上多余的水,在插片前可将盖玻片的下部边缘与吸水纸轻柔接触数秒.
3.2.6 贴片后即写标签,经常性复查
因为盖玻片上不能刻写标记,所以在贴片放置时,保证标签编号与切片顺序绝对一一对应,就是一个特别重要的事情了.
为了保证绝对不出错,在贴片和插片放置时要绝对做的一下几点:
(1)每次插入一片组织后就必须将此切片的编号进行登记.
(2)保证"三个序列的对应".首先是染色盒按照固定的方向和顺序插放.其次是在标签纸上书写编号的顺序.再次是切完后蜡块放置排列的顺序.
(3)在贴片过程中,应当有意识地不断复查染色盒中的切片数和标签纸上已登记的标签数,以及时发现可能由于疏忽超造成地错误.
3.2.7 充分除去上游的工作残留液
因为染色盒是封闭性的,体积小重量轻,使用时即安全又轻巧方便.自制的夹子能够防止盒盖脱落,即使剧烈的甩动也不会发生飞片和碎片.用吸水纸包裹后甩动染色盒,可以达到最大去残留液的效果.
3.2.8 高效率的封片方式
牋 用这种染色盒的一个明显优点就是封片效率高.经过对比,在完成相同的封片数量时,这种方法所用的时间只是常规方式的三分之一左右,而且,随着贴片的数量增多,这种批量封片的高效率优势就越明显.
具体操作方法是:首先将载玻片放置于晾片板上,按照切片时登记的顺序依次将标签纸贴在载玻片上.再将树胶依次滴在晾片板上所有盖玻片上.自透明二甲苯中取出染色盒.可在左手掌中垫上吸水纸裹住染色盒,甩动几次,以除去滞留的二甲苯液.去盖后,右手持细弯嘴镊按顺序夹取出盖玻片依次覆盖在载玻片上.
4 讨论
4.1 染色效果:与常规方法染色的比较
因为染色过程与常规方法并无不同,所以染色效果与传统方式的并无区别.
4.2 玻片的表面积比较:工作液残留面积比较
与载玻片比较,盖玻片表面积仅为其二分之一到三分之一,所以可黏附液体的表面积明显减少,从而降低了残留液量.
4.2.1 比值约为2|3:１
4.3 体积与容量比值:相对空间利用率提高了十倍.
经过测量和计算,理论上,盖玻片染色盒的相对体积与容量比值仅为载玻片染色栏的10到13分之1.也就是说,在占用相同的空间的条件下,前者的工作效率是后者的十多倍.在实际应用中,特别是对于切片数量上百的制片过程,这种盖玻片染色盒的高效率优势更加明显.
4.4 去残液程度:甩动下安全程度比较
与常用的载玻片染色框比较,载玻片染色盒有着明显的特点.因为染色盒为闭式设计,且重量轻,可充分甩动以除去残留液,不会发生失手和飞片的意外.应为体积小,外形方整,便于用吸水纸吸附残液.这些特点可以使来自上游的残留液减少到最少限度.