文章列表
 
2009-04-29 0:04
细胞爬片HE染色
要点: 首先是细胞能够爬好,细胞分布均匀,密度适中;   
            其次是不会在染色过程中脱片,细胞形态走形!


相应的处理----要选择状态良好的细胞,一般要选择消化吹打均匀传代第二或三天的细胞,镜下的标准为细胞平铺为瓶底的80%左右为宜。细胞分布均匀,形态良好,吸取(标准是吸取而不是倾倒)培养基,加无血清培养基或PBS洗一遍,加1ml胰酶(大号瓶可加致2ml),轻晃使胰酶分布到每个角落,考虑胰酶刚刚融

 
2009-04-28 22:04

本人认为:因为目前除了电镜是检测凋亡的金标准外,其他的方法均有一定的不足,所以一般都会用到两种以上的方法对细胞调亡进行检测,如:流式+荧光染色,荧光染色+DNAladder等等。
TUNEL的方法是体内试验时检测调亡的常用方法,而流式对体内细胞的调亡则无能为力。

 
2009-04-28 21:32
真核细胞DNA的制备与定量

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验。
根据材料来源不同,采取不同的材料
 
2009-04-28 21:30

A:来自promega:

1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素

 
2009-04-28 21:28
一、试剂准备
缓冲液A                                               缓冲液B
 
2009-04-28 21:17

底物DNA没有被所用限制酶切断,为什么?

可以考虑以下几种情况:

1. 底物DNA上没有该限制酶的识别、切断位点。特别是一些经过重组等处理的DNA,碱基易发生缺失、变化等。

2. 限制酶识别位点上的A或C被甲基化。部分限制酶对识别位点中的碱基是否被甲基化比较敏感,从而无法切断该位点。有关甲基化对限制酶的酶切反应的影响,在TaKaRa的商品目录A-37~A-40页中有详细说明,可供参考。

 
2009-04-28 20:54
质粒DNA的碱裂解法提取与纯化

细菌质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份,通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态,但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。
质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取,本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。
碱裂解法是一种应用最为广泛的
 
2009-04-28 20:52
质粒的转化

质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中,实现重组克隆的增殖,便于后续分子操作。可以采用多种方法筛选和鉴定目的克隆。

实验目的:掌握热激法或电转化法转化大肠杆菌感受态细胞及转化

 
2009-04-28 20:51

大肠杆菌电转化感受态细胞制备
第一天:
1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养
2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用
3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

第二天:

 
2009-04-28 20:44
酸缸清洁液的配方

清洁液的配方有三种,可以根据需要选用不同的强度。
(1)强酸溶液:
重铬酸钾63克 ; 浓硫酸1000ml ; 蒸馏水200ml。
(2)次强酸溶液:
重铬酸钾120克 ; 浓硫酸200ml ; 蒸馏水200ml。

 
   
 
 
文章分类
 
   
 
文章存档
 
     
 
最新文章评论
  

内容全!!!
 

您好,我想请教您几个问题 1 电击和热击转质粒的区别,最好详细些~ 2 我最近用电击的
 

啥破玩意,看都看不清
 

谢谢
 

内容全面,谢谢指教!
   
帮助中心 | 空间客服 | 投诉中心 | 空间协议
©2012 Baidu